Como inocular cultura líquida via ágar em uma glovebox?
Se tens uma glovebox e quer saber como inocular cultura líquida via ágar dentro de sua glovebox esse é o artigo para você.
A inoculação de uma cultura líquida via ágar é um processo extremamente simples em teoria e aparentemente fácil de ser realizado na prática. Porém, a glovebox é um equipamento que apresenta algumas limitações no movimento dos braços do cultivador, o que pode dificultar o processo de ser realizado nas primeiras vezes, até o cultivador pegar a manha através da repetição do processo. Nesse ponto, repetição é a chave do sucesso (mas repetição com estudo).
Quanto ao realizar esse procedimento de inocular cultura líquida com sucesso é preciso de alguns cuidados básicos em relação à limpeza, à ordem da colocação dos materiais e outros detalhes, sendo isso que será abordado aqui neste artigo para ajudar vocês a produzirem suas lindas culturas líquidas cheias de micélio limpo.
Primeiro passo: realizar a assepsia da parte interna da Glovebox para inocular cultura líquida
Nosso microclima de trabalho vai ser dentro da glovebox. Dessa forma, queremos que todo o interior dela, em todos os cantos e imperfeições estejam muito bem limpos, pois realizaremos um procedimento bem sensível ali dentro e não queremos contaminar nossa placa de petri já colonizada nem a nossa cultura liquida que está para ser feita. Então, limpar muito bem com álcool 70° ou com hipoclorito de sódio o interior da glovebox e também toda a superfície das luvas.
Temos que manter aqui dentro as coisas o mais limpas quanto possível! Se tens uma lâmpada UV na sua glovebox, ligue ela por 10 minutos com a palma da luva para cima e depois mais 10 minutos com a palma da luva para baixo. Lembre-se de SEMPRE TAPAR SUA GLOVEBOX COM UM BLACKOUT QUANDO LIGAR A LUZ UV. A luv UV é perigosa e deve ser usada como um ferramenta benéfica, não maléfica.
Segundo passo: colocar todos os materiais para dentro para inocular cultura líquida
Para colocar seus materiais para dentro da glovebox tu precisas se lembrar de uma coisa: o ambiente interno dela está totalmente limpo, e tudo o que está no ambiente externo está totalmente sujo, em contato com o ar do ambiente. Portanto, para inserirmos nossos materiais lá dentro, devemos antes borrifar eles muito bem com alcool 70° para realizar a assepsia deles e que assim eles não entrem sujos em nossa glovebox. Materiais que vamos inserir na glovebox: frasco de cultura líquida, placa de petri vedada, cabo de bisturi e a lâmina do bisturi (essas lâminas vem em lacres já esterilizadas).
Lembre-se sempre de que TUDO antes de entrar na glovebox deve ser limpo ou todo o trabalho de limpar o interior da glovebox vai perder a eficiência.
Terceiro passo: Inocular cultura líquida
Agora que nossa glovebox está limpa e nossos materiais previamente limpos estão todos lá dentro, basta com que a gente realize o procedimento. O procedimento é o seguinte: primeiramente a tampa da cultura líquida deve ser aberta sem retirar a tampa, apenas desrosqueada para que fique fácil de tirar ela depois. Após isso, vamos tirar a fita que veda nossa placa de petri e deixar essa fita em um canto que não nos atrapalhe. Agora vamos abrir o plástico que guarda a lâmina do bisturi e vamos colocar a lâmina no bastão. Está tudo engatilhado, agora é só fazer! Com muita calma, vamos abrir a tampa da placa de petri, apoiar essa tampa com A PARTE DE DENTRO PARA CIMA e vamos cortar pedacinhos retangulares do nosso ágar. Com uma mão agora vamos abrir a tampa da cultura líquida e com a outra vamos utilizar o bisturi para coletar esses pedaços que cortamos e jogar para dentro da cultura líquida. Feito isso, vamos fechar nossa CL e nossa placa de petri. E está pronto o procedimento!!
Observações importantes:
- Após colocar a lâmina no bisturi, ela não pode tocar em nada que não seja o interior da placa ou o interior da cultura líquida. Caso toque em qualquer outra coisa, as chances de contaminação aumentam muito!
- Se for inocular mais de uma cultura liquida com a mesma espécie, não precisa trocar a lâmina. Apenas siga o cuidado dito acima.
- Se for inocular cultura líquida com outra espécie, é necessário que você troque de lâmina. Portanto, sempre coloque pra dentro da glovebox o número de lâminas compatível com o número de espécies a serem inoculadas